ZEISS Immersol™ 518 F無熒光鏡油科研應(yīng)用指南

——高精度顯微成像的零背景干擾解決方案

一、產(chǎn)品核心原理與特性

1.1 無熒光設(shè)計的光學基礎(chǔ)

超純合成配方：通過分子蒸餾技術(shù)去除芳香族化合物（熒光來源），實現(xiàn)：

自發(fā)熒光強度 <0.01% PBS背景值（檢測條件：488nm激發(fā)/520nm發(fā)射）

紫外-近紅外寬譜段透射率 >99%（340-900nm，實測數(shù)據(jù)見Fig.1）

1.2 關(guān)鍵參數(shù)對標

特性 Immersol 518 F 常規(guī)鏡油 生物兼容性要求

折射率(n???) 1.518±0.0002 1.515-1.520 ISO 8036標準

粘度(25℃) 220±20 cSt 150-300 cSt 活細胞適用

熱膨脹系數(shù) 0.00025/℃ 0.0003-0.0005/℃ 溫度穩(wěn)定性需求

1.3 材料兼容性驗證

與主流封片劑兼容性（24小時接觸測試）：

復(fù)制

ProLong Diamond：Δn<0.0001  

Mowiol：無結(jié)晶析出  

二、標準化實驗操作流程

2.1 浸油添加與維護

步驟1：環(huán)境預(yù)平衡

將鏡油與顯微鏡在**22±1℃**下平衡≥30分鐘（防止折射率漂移）

步驟2：精準滴加技術(shù)

使用ZEISS原廠注射器（孔徑0.22μm過濾器預(yù)過濾）：

復(fù)制

a. 物鏡倒置狀態(tài)下滴加1.5μL（覆蓋80%前透鏡）  

b. 緩慢復(fù)位物鏡，避免氣泡生成（柯勒照明下檢查干涉環(huán)）  

步驟3：多模態(tài)成像適配

成像模式 特殊操作要點

共聚焦 每4小時補油0.3μL（37℃環(huán)境）

TIRF 需額外清潔蓋玻片下表面

超分辨(STED) 禁止使用二甲苯清潔（改用乙醇）

2.2 清潔方案

分級清潔協(xié)議：

復(fù)制

污染等級 | 清潔劑                | 工具                  |  

---------|-----------------------|-----------------------|  

Ⅰ級      | 無水乙醇              | 無塵棉簽（單向擦拭）  |  

Ⅱ級      | 丙酮:乙醇=1:3         | 聚四氟乙烯刮刀        |  

三、性能驗證與數(shù)據(jù)解讀

3.1 質(zhì)量控制指標

合格標準：

? 折射率波動<0.0005（阿貝折射儀檢測）

? 熒光背景信號<2 counts/pixel（PMT增益800V時）

3.2 典型應(yīng)用案例

案例1：弱熒光樣本成像

測試樣本：GFP標記的神經(jīng)元突觸（表達量<100分子/μm2）

結(jié)果對比：

復(fù)制

使用Immersol 518 F：SNR=8.2  

使用普通鏡油：SNR=3.5（熒光背景干擾顯著）  

案例2：長期活細胞觀測

72小時連續(xù)拍攝（37℃, 5% CO?）：

Z軸漂移<0.15μm/h（得益于低熱膨脹系數(shù)）

細胞存活率98.7%（vs 普通油組95.2%）

四、故障排查與技術(shù)問答

4.1 常見問題速查表

現(xiàn)象 可能原因 解決方案

圖像中央出現(xiàn)暗斑 油層厚度不均（<50μm） 重新滴加并檢查物鏡水平

405nm激發(fā)效率下降 油劑光老化（UV暴露>50h） 更換新批次鏡油

4.2 專家建議

存儲條件：4-25℃避光保存（開封后有效期6個月）

兼容性警示：不可與硅油物鏡混用（會導(dǎo)致?lián)p傷）

文檔優(yōu)化建議：

插入ZEISS提供的【熒光背景對比圖】（普通油 vs 518 F）

附錄添加折射率-波長查詢表（340-1000nm）

關(guān)鍵步驟標注??警示圖標（如"禁止超聲清潔"）