
蛋白質(zhì)相互作用分析技術(shù)實(shí)現(xiàn)無標(biāo)記實(shí)時(shí)檢測
內(nèi)容簡介:
本文系統(tǒng)介紹Bio-Rad ProteOn XPR36蛋白相互作用陣列系統(tǒng)在分子互作研究中的技術(shù)優(yōu)勢。詳細(xì)解析其表面等離子體共振(SPR)檢測原理、多通道并行分析能力和動(dòng)力學(xué)參數(shù)測定精度,展示其在藥物篩選和通路研究中的應(yīng)用價(jià)值。
正文:
表面等離子體共振技術(shù)無需標(biāo)記即可實(shí)時(shí)監(jiān)測分子間相互作用。Bio-Rad ProteOn XPR36系統(tǒng)采用創(chuàng)新性的交叉通道設(shè)計(jì),可同時(shí)分析36對相互作用,大大提高了檢測通量。
在傳感器芯片設(shè)計(jì)方面,系統(tǒng)使用納米級(jí)金膜傳感器,SPR角分辨率達(dá)0.0001度,對應(yīng)質(zhì)量靈敏度為1pg/mm2。微流體系統(tǒng)采用層流技術(shù),樣品消耗量僅需50μL,流速控制精度±0.25%。溫控系統(tǒng)精度達(dá)±0.005℃,確保動(dòng)力學(xué)測量的準(zhǔn)確性。
在動(dòng)力學(xué)分析方面,系統(tǒng)可實(shí)時(shí)監(jiān)測結(jié)合和解離過程,自動(dòng)計(jì)算結(jié)合速率常數(shù)(ka)、解離速率常數(shù)(kd)和平衡解離常數(shù)(KD)。檢測范圍涵蓋高速結(jié)合(ka>106 M-1s-1)到高親和力結(jié)合(KD<1pM)。數(shù)據(jù)質(zhì)量指標(biāo)Rmax值誤差<5%,χ2值<2,符合高質(zhì)量數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)。
應(yīng)用研究顯示,在抗體藥物篩選中,系統(tǒng)可在6小時(shí)內(nèi)完成36種候選分子的親和力測定,KD值測定精度達(dá)±10%。在信號(hào)通路研究中,可同時(shí)分析多個(gè)蛋白質(zhì)的相互作用網(wǎng)絡(luò),為系統(tǒng)生物學(xué)研究提供重要工具。
關(guān)鍵詞: 表面等離子體共振、蛋白質(zhì)相互作用、無標(biāo)記檢測、動(dòng)力學(xué)分析、高通量篩選
